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大肠菌群、粪大肠、大肠埃希氏菌检验的相干常识

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1、大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌检验办法
 
(1)大肠菌群(colifoms)
 
一群在36°C培育48h可发酵乳糖产酸产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阳性无芽孢杆菌。
 
该菌次要来源自人畜粪便,作为粪便传染目标评估食品的卫生情况,揣度食品中肠道致病菌传染的大概。
 
 
(2)粪大肠菌群(Fecal colifoms)
 
也称耐热大肠菌群。指大肠菌群中能在44.5C成长、发酵乳糖发生气体的一群细菌。
 
与大肠菌群一样,并非细菌学分类定名,而是卫生细菌范畴的用语,它不代表某-一个或某一属细菌,而指的是存在某些特征的-组与粪便传染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完整分歧。
 
食品卫生学意思:作为粪便传染食品的目标菌,MPN值愈低则阐明食品受粪便传染水平及对人体健康风险水平愈低
 
作为肠道致病菌传染食品的指针,大肠菌群数目越多则肠道致病菌存在的大概性就越高,但二者之间并不老是呈平行干系。
 
(3)大肠埃希氏菌(Escherichia coli)
 
分类学观点:肠杆菌科、埃希氏菌属。是人和温血植物肠道内遍及存在的细菌,是粪便中的次要菌种。个别糊口在人大肠中并不致病,但它侵入人体一些部位时,可惹起传染。次要有:
 
■O抗原(菌体抗原,150个)
■K抗原(荚膜抗原,90个)
■H抗原( 鞭毛抗原,50个)
 
 
(4)致泻性大肠埃希氏菌
 
能侵入肠粘膜上皮细胞,惹起食物中毒的大肠埃希氏菌。产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)-肠胃炎、旅行性腹泻。
 
■致病性大肠埃希氏菌(EPEC)-婴儿腹泻;
■肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)--出血性结肠炎;(O157∶H7;O104∶ H4;O111;O126等)
■侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)—杆菌性痢疾;
■粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)—急慢性腹泻。
 
2、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌的干系
 
 
3、相干检验办法标准
 
■GB4789.3-2016食品宁静国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数
■GB 4789.38-2012食品宁静国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌计数
■GB 4789.39- -2013食品宁静国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数
■GB4789.6- 2016 食品宁静国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验
■GB4789.36-2016食品宁静国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验。
 
4、大肠菌群和粪大肠菌群的检测流程图
 
 
5、大肠菌群计数检验的操纵
 
MPN法:
 
 
6、成果报告
 
按照经确证后的对应浓度阳性管数查MPN表(MPN:最大概数,基于泊松漫衍的一种直接计数办法)
 
 
7、WRBA平板计数法
 
 
8、成果报告
 
经末了证明大肠菌群阳性的BGLB试管比例乘以VRBA菌落数再乘以稀释倍数,即为每克(毫升)样品中大肠菌群数。
 
 
如:稀释倍数10-3,汲取样品稀释液1ml平板典范或可疑菌落数100挑取10个典范或可疑菌落接种BGLB→阳性6管
 
 
9、大肠埃希氏菌MPN计数法检验步伐
 
 
 
10、大肠埃希氏菌在EMB上的菌落形状
 
具玄色中心有光泽或无光泽的典范菌落。
 
 
11、靛基质实验(呵噪实验)(I)
 
■道理:某些细菌能分化卵白质天生呵器,呵跺与对二甲基氨基苯醛分离,构成玫瑰呵噪白色化合物。
■培育基:色氨酸肉汤。
 
 
12、甲基红反响(MR)
 
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖,在分化葡萄糖进程中发生丙酮酸,进一步分化中,因为糖代谢的道路差别,可发生乳酸,虎魄酸、醋酸和甲酸等大批酸性产品,可以使培育基PH值降低至pH4.5以下,使甲基红唆使剂变红。
 
■培育基:MR-VP培育基。
 
13、V-P实验(VP)
 
某些细菌在葡萄糖卵白陈水培育基中能分化葡萄糖发生丙酮酸,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇,后者在强碱环境下,被空气中氧氧化为二乙酰,二乙酰与卵白陈中的肌基天生白色化合物,称V一P(+)反响。
 
36℃±1℃培育48h,加数滴甲基红溶液"
 
 
 
 
14、柠檬酸盐操纵实验
 
有的细菌如产气杆菌,能操纵柠檬酸钠为碳源,是以能在柠檬酸盐培育基上成长,并分化柠檬酸盐后发生碳酸盐,使培育基变为碱性。此时培育基中的溴麝香草酚蓝唆使剂由绿色变为深蓝色。不能操纵柠檬酸盐为碳源的细菌,在该培育基上不成长,培育基稳定色。
 
15、大肠埃希氏菌与非大肠埃希氏菌的生化辨别
 
 
■大肠埃希氏菌为革兰氏阳性无芽胞杆菌,发酵乳糖、产酸、产气,IMViC 生化实验为十十——或一十——。只需有1个菌落判定为大肠埃希氏菌,其所代表的LST肉汤管即为大肠埃希氏菌阳性。根据LST肉汤阳性管数查 MPN 表(见附录B),报告每 g (mL)样品中大肠埃希氏菌 MPN 值。
 
16、大肠埃希氏菌平板计数法(第二法)
 
 
17、大肠埃希氏菌平板计数
 
(1)拔取2个~3个合适的持续稀释度的样品匀液,每一个稀释度接种2个无菌平皿,每皿1 mL。同时取1 mL稀释液参加无菌平皿做空白比较。
 
(2)将10 mL~15 mL冷至45℃±0.5℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)倾泻于每一个平皿中。当心扭转平皿,将培育基与样品匀液充沛混匀。待琼脂凝集后,再加3 mL~4 mLVRBA-MUG笼盖平板表层。凝集后翻转平板,36 ℃±1℃培育18 h~24 h。
 
(3)抉择菌落数在10 CFU~100 CFU之间的平板,暗室中360nm~366 nm波长紫外灯映照下,计数平板上发浅蓝色荧光的菌落。
 
(4)检验时用已知MUG阳性菌株做阳性和阳性比较。
 
18、大肠埃希氏菌平板计数的报告平板计数的报告
 
两个平板上发荧光菌落数的均匀数乘以稀释倍数,报告每g(mL)样品中大肠埃希氏菌数,以CFU/g(mL)表现。若全部稀释度(包含液体样品原液)平板均无菌落成长,则以小于1乘以最低稀释倍数报告。
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